罗彻斯特大学位于纽约州罗彻斯特市，在纽约上州，安大略湖附近，靠近多伦多，因为地理位置偏北，冬季较长，气候寒冷，降雪多。罗彻斯特城面积不大，因此也被亲切地称呼为“罗村”，距离多伦多大约一小时车程，距离纽约市中心大约7小时车程。

河滨校区

River Campus是整个学校的学术以及行政中心。它坐落在杰尼斯河畔，以杰尼斯河东岸的博士伦公园为界，距罗彻斯特市区以南大约3.2千米，共占地约0.81平方千米。

该校区最初的建筑于1930年投入使用。主要教学楼（Rush Rhees图书馆、Dewey、Bausch & Lomb、Morey、与Lattimore Halls）都以希腊文艺复兴风格（Greek revival style）设计，并互相围绕成伊斯曼方庭（Eastman Quadrangle）。伊斯曼方庭被认为是校园内风景最好的地方。

医学中心

罗彻斯特大学医学中心（University of Rochester Medical Center，URMC）是全美顶尖的私立教学研究型医院，紧邻River Campus，是罗彻斯特大学最大的组成部分和纽约州第6大雇主，拥有超过26,000名雇员。

其是负责学校医学教学研究以及医疗护理设施所在的主要校区，由包含斯特朗纪念医院在内的6所医院、伊斯曼口腔健康研究所等研究单位、罗彻斯特大学医学与牙科学院和罗彻斯特大学护理学院组成。

音乐学院

伊斯曼音乐学院有自己单独的校区，其坐落在罗彻斯特市城区。该校区有学生住宿区，教室、演奏以及表演设施与伊斯曼剧院。该校区还有全北美最大的音乐图书馆西布利音乐图书馆，该馆拥有美国最大的私人乐谱收藏。

南校区

南校区坐落在Brighton镇，紧邻罗彻斯特市南部。

该校区包括有Laboratory for Laser Energetics，the Center for Optics Manufacturing，the Center for Optoelectronics and Imaging，and the now defunct Nuclear Structure Research Laboratory (NSRL)。研究生住宿区Whipple Park也在此区。